Dados do Trabalho

Título

UTILIZAÇAO DA ENGENHARIA GENETICA CRISPR/CAS9 APLICADA AO MIR-21 EM LINHAGEM DE CARCINOMA RENAL PRIMARIO DE CELULAS CLARAS

Introdução e Objetivo

O miR-21 está regulado positivamente em muitos tumores, incluindo o Carcinoma Renal de Células Claras (CRCC). Esse miRNA está associado à diversas vias moleculares relacionadas ao início e progressão do CRCC, assim podendo desempenhar o papel de alvo terapêutico e prognóstico atraente que possa controlar diversas etapas desta patogênese de forma simultânea. O miR-21 possui diversos genes alvos, dentre eles o RECK que regula negativamente a expressão de MMP-9, uma metaloproteinase responsável por processos de degradação da matriz extracelular. Segundo dados da literatura, a interrupção das sequências pré-miR-21 leva à redução da proliferação, migração e invasão celular. Dessa forma realizamos a edição gênica do miR-21 através do sistema CRISPR/Cas9 em linhagem celular de carcinoma renal primário de células claras (786-O).

Método

Para os experimentos da ferramenta CRISPR/Cas9 foi utilizado o plasmídeo PX330, o qual a metodologia foi padronizada por Zhang F. et al. A seleção da sequência de sgRNA (single guide RNAs) para o miR-21 foi feita pela plataforma MIT (crispr.mit.edu). Foram feitas as transfecções dos plasmídeos PX330 com o sgRNA 1 para miR-21 com o reagente Xfect™ Transfection Reagent.

Resultados

Nos nossos resultados preliminares encontramos uma diminuição estatisticamente significante (p=0.0002) da expressão do miR21 nas células transfectadas com a Guide 1 em comparação com as células branco, que não foram submetidas a transfecção. Além disso, encontramos o aumento da expressão da RECK (<0.0001) e diminuição da expressão da MMP-9 (0.0006).

Conclusão

Observamos que a técnica CRISPR/Cas9 permitiu o knockdown do miR-21, bem como a regulação positiva e negativa de alguns de seus genes-alvo. Consideramos nossos resultados in vitro promissores, porque miR-21 pode desempenhar um papel importante na progressão do câncer de rim, dessa forma este estudo pioneiro pode contribuir para o uso destas moléculas na era da medicina de precisão do câncer de rim, abrindo uma perspectiva de estudo que poderão no futuro favorecer o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas.